02 sep 2019

x.sight™, la nouvelle génération d’impression single-cell avec preuve de clonalité

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x.sightTM, c'est la nouvelle technologie d’impression single-cell.
Les instruments x.sightTM permettent un ensemencement monocellulaire efficace et rapide combiné à une excellente viabilité cellulaire sans risque de cross-contamination. De plus, ils apportent une preuve documentée de la clonalité cellulaire. Cette technologie brevetée allie une optique de haute résolution à une analyse d'image en temps réel pour distribuer des micro-gouttelettes contenant une cellule unique.

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Figure 1. Les appareils x.sightTM , basés sur une imagerie performante, isolent et distribuent de manière entièrement automatisée des cellules uniques. Le c.sightTM utilise un éclairage en contraste de phase pour la détection des cellules, tandis que le f.sightTM est en complément équipé d'un laser pour un tri basé sur la fluorescence des cellules

Séquençage de cellules individuelles

Les méthodes habituelles d’isolement cellulaire ne permettent pas de démontrer la clonalité des cellules, faisant courir le risque d’obtenir des données faussées ou inexploitables.
Par ailleurs, le maintien de l’intégrité cellulaire jusqu’à l’étape de lyse est essentiel à la préservation de l’intégrité des acides nucléiques, participant ainsi à la qualité et la reproductibilité des résultats. La technologie x.sightTM, fonctionnant sans accélération des cellules (forces de poussée environ 1000 fois inférieures au FACS), permet un dépôt des cellules en douceur, ce qui garantit une grande viabilité et fournit une base optimale pour les différentes analyses.

Développement de Lignées Cellulaires clonales par fluorescence

Le développement de lignées cellulaires clonales est une étape cruciale dans de nombreuses applications, y compris la production de produits biopharmaceutiques (par exemple, les anticorps monoclonaux). La lignée cellulaire hôte est transfectée avec le gène d'intérêt. Par la suite, une sélection est exercée pour ne retenir que les cellules qui ont incorporé et produisent de manière significative le transgène. Des milliers de clones doivent être criblés pour être sélectionnés en vue d'une analyse et d'une production ultérieures. Depuis 2016, les autorités réglementaires exigent également que les lignées cellulaires destinées à la production biopharmaceutique proviennent d'un seul clone.
Par ailleurs, la possibilité de sélectionner et isoler les cellules sur la base de leur fluorescence offre aux utilisateurs du f.sightTM encore plus de flexibilité : exclusion des cellules mortes, identification d’un type cellulaire précis, screening des clones high-producers à isoler... Ainsi, l’utilisation du f.sightTM permet d’améliorer l’efficacité et de réduire fortement la durée des workflows de génération des lignées cellulaires.

Efficacité et précision de détection d'une cellule individuelle

Le f.sightTM réalise l’impression automatique de cellules individuelles en environ 5 min pour une plaque de 96 puits et 15 min pour une plaque de 384 puits. Les retours d’utilisateurs montrent une efficacité d’impression single-cell d’environ 95%. De plus, les images générées pour apporter la preuve de clonalité permettent aux utilisateurs de confirmer ou d’infirmer la clonalité de chaque puits. Des expériences réalisées de manière indépendante montrent ainsi un taux de corrélation de plus de 95% entre les images du f.sightTM et une analyse réalisée à posteriori avec un scanner.

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Figure 2. Corrélation entre f.sightTM et les images du scanner

Le f.sightTM: haute sensibilité et précision du tri

Le f.sightTM dispose d’un système innovant à deux caméras qui réalisent simultanément l’acquisition des informations de contraste de phase et de fluorescence à pleine résolution. La sensibilité du f.sightTM permet d'utiliser de faibles concentrations de colorant, ou de différencier de faibles écarts de marquages. Avant la distribution, un scatter plot peut être généré pour déterminer la distribution de l'intensité de la fluorescence pour une population cellulaire donnée. La figure 3 montre l'intensité de fluorescence des cellules distribuées qui n'ont pas été colorées (No stain), des cellules colorées mais non triées (Stained, No Sort) et de la même population de cellules distribuées triées selon leur forte intensité (Stained, High) et faible intensité (Stained, Low) de fluorescence. Ainsi, l’utilisateur du f.sightTM peut facilement choisir une population cellulaire à enrichir.

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Figure 3. Intensité de fluorescence des cellules triées avec le f.sightTM

Cytena tiendra  un stand et présentera son activité à la Cell Culture B4B-Connection des 8 et 9 octobre 2019 au Genocentre d'Evry

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