09 nov 2018

Des anticorps sur mesure, fonctionnels en IHC-p : un challenge relevé par Biotem

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De nombreuses applications de laboratoire utilisent les anticorps comme agent de détection d’une cible d’intérêt. Cette dernière décennie voit également monter en puissance les immunothérapies ou thérapies à base d’anticorps. Certaines de ces thérapies sont également associées à un test « compagnon » afin de discriminer les patients répondeurs des non répondeurs à un traitement. Alors que les anticorps peuvent être utilisables dans plusieurs applications qui linéarisent la cible telle que le western blot (WB) nombreux sont ceux qui doivent s’adapter à des applications où la conformation tridimensionnelle de la cible entre en jeu. Complication supplémentaire, la cible peut être chimiquement modifiée et/ou sa conformation peut même être profondément perturbée lors de la préparation des échantillons à analyser. C’est le cas notamment de l’immunohistochimie (IHC) sur coupes paraffinées (IHC-p).

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Il y a beaucoup de revues critiques sur la validation des anticorps et leur valeur intrinsèque. Celle de Gillian O’Hurley et al. dont la figure ci-contre est extraite, le rappelle immédiatement, et dans le titre même : ‘‘Garbage in, garbage out: A critical evaluation of strategies used for validation of immunohistochemical bio-markers’’ Molecular Oncology 8 (2014) 783 –798.

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Représentation schématique de divers facteurs pouvant modifier la structure tissulaire des coupes histologiques

Cette revue pointe le manque d’anticorps monoclonaux spécifiques bien caractérisés et adaptés à l’IHC et insiste sur les spécificités exigeantes de la technique IHC-p.

Afin de répondre à cette problématique BIOTEM, forte de son expertise de plus de 38 ans dans le domaine des anticorps, propose une plateforme entièrement dédiée au développement d’anticorps monoclonaux de haute qualité et haute performance en IHC-p.

L’immunogène : un élément crucial pour le succès d’un développement d’anticorps

>>> IHC Peptide ProfilerTM

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Cette technologie développée en exclusivité par BIOTEM permet le design de peptides immunogènes hautement optimisés pour la génération d’anticorps monoclonaux fonctionnels en IHC.
Contrairement aux algorithmes traditionnels de prédiction d’épitopes B (lesquels prennent principalement en compte des paramètres relatifs à l’hydrophobicité, l’accessibilité, l’anti-génicité et la flexibilité), l’IHC Peptide Profiler intègre un module tout spécifiquement dédié à l’analyse et à la modélisation des épitopes lors des traitements de l’échantillon en IHC-p (fixation, passage en paraffine et antigen retrieval). En effet, au cours de ces traitements, les épitopes peuvent être (selon leur séquence primaire et leur environnement direct) préservés, plus ou moins modifiés (épitopes cryptiques), voire détruits par la présence d’adduits chimiques et/ou de « crosslinks » intra ou inter chaine.
Ce module constitue donc le cœur de la technologie et permet une analyse globale des cibles selon de multiples paramètres originaux et spécifiques à l’IHC-p. In fine, un classement des meilleurs candidats peptidiques est proposé regroupant les peptides correspondant aux zones les moins susceptibles d’être modifiés par les traitements IHC-p. Pour chacun d’eux un score reflétant la faisabilité du projet est affiché.

>>> Formulation IHC d’antigène protéique

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A l’exact opposé de l’approche précédente et de manière idéalement complémentaire, BIOTEM dispose également de formulations « spécifiques IHC » destinées à modifier de manière subtile les protéines dans le but de rapprocher les immunogènes des antigènes modifiés par les traitements en IHC sur coupes paraffinées.
L’anticorps généré par un tel immunogène aura cette fois de plus grandes affinité et spécificité pour l’antigène sur lame que pour l’antigène natif.

Le criblage en IHC : un facteur déterminant pour l’identification de bons candidats

>>> Criblage haut débit en IHC
Le criblage est essentiel afin d’identifier des candidats anticorps reconnaissant spécifiquement une cible en IHC-p. Cette étape est effectuée en incubant chaque solution d’anticorps sur lames déparaffinées comportant un témoin positif et un témoin négatif ; il s’agira de lames à échantillons composites, type ‘‘Tissue Micro Arrays’’ (TMA), réalisées à façon pour chaque projet : TMA artificiel à partir de cellules transfectées exprimant la cible d’intérêt et/ou TMA naturel à partir de tissus. Le traitement des lames sera effectué sur un automate permettant le criblage haut débit, tout en garantissant une reproductibilité absolue du processus. Les lames seront ensuite scannées et analysées par un histologiste confirmé.

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